第十九章 掉链子(2 / 3)
林萧然弄清原委之后没有多事,却看得心中大畅,可以成功表达的质粒已在秦雅手中,对方注定无法表达出目的蛋白!
他放下心思,再次开始了自己的实验。
却在此时,忽见身边人影闪动,转头看去,只见秦雅拎了一摞平板,出现在了近前,她的脸色却不是十分好看,想说什么,却欲言又止。
“怎么,有什么事吗?”林萧然讶然道。
“你看看这些……,”秦雅吞吞吐吐,缓缓将那摞平板摆在实验台上,用手扶稳,脸色则变得更加难看,“不知道为什么,似乎……,出了一点问题。”
林萧然抽出一只,拿在手中对着光打眼看去……,其实根本不用细看,只在平板底部看到一些培养基,培养基清清亮亮,无甚他物,于是疑惑道,“这是准备做什么,接种吗?”
“这是抗性筛选,接过种了,并且经过了培养,但是,细胞没长出来!”听秦雅的声音都快哭了,扶着平板盒的手已经有些发颤。
“都没长出来吗?”林萧然有些不敢相信,再次从中抽出两只平板进行观察,眼前仍是一片清亮,哪有半点细胞生长的迹象?
“没有,抗性筛选没有成功,意味着……,转染可能失败了!”秦雅的声音中已经开始呜咽,显得极其难过,忙碌了近两周,现在却颗粒无收。
所谓的细胞转染,是将构建的质粒,也就是遗传物质,通过物理手段导入细胞核,在细胞发生分裂的时候,有一定机率整合进入主基因序列,接下来,该细胞拥有质粒赋予的生理功能,对于当前实验来说,可以就是复制目标蛋白,并且显示遗传标记!
在此过程中,真正发生转染的细胞数量极低,绝大多数并未发生转染,我们如何将完成转染的细胞挑选出来呢?
我们挑选转染细胞株的手段,就是通过遗传标记,只要细胞发生了转染,遗传标记就会发生作用,表现出一定的生理特征,通过这一生理特征,可以方便地将转染细胞挑选出来。
美津在质粒中加入的遗传标记有两个,其一是抗性标记,只要转染成功,细胞将对特定的抗生素具有抗性,如果我们在培养基内添加该抗生素,细胞依旧可以生长,说明很有可能是转染株,直接挑出即可;另一个遗传标记是营养缺陷,在细胞转染中,使用得最多的是二氢叶酸缺陷型,只要培养基没有添加二氢叶酸,细胞便不会正常生长!
实验中,两种标记可以同时筛选,也可以分步操作,结果殊途同归,当然,同时筛选的效率更高,但需要更加丰富的实验经验。
秦雅经验不足,采用了分步操作方式,即使这样,仍然没有筛选成功。
在抗生素环境中,没有细胞正常生长,说明没有出现该遗传标记的生理特征,质粒没有被整合进主基因序列,转染环节出现了问题!
“做过镜检吗?”林萧然也意识到了问题的严重性,他沉声问道。
“做了,能检出细胞,但细胞的数量太少,说明生长受到了极大的抑制,你说……,现在怎么办啊!”秦雅说话间,都快哭出声了。
啧……,林萧然当然知道转染出现了问题,这种操作,对于不是十分专业的团队来说,确实难度很高,但对于美津而言,就不应该了。